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大鼠肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-I)ELISA试剂盒

简要描述:

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大鼠肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-I)ELISA试剂盒组织样本的处理:

用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

关于大鼠肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-I)ELISA试剂盒的固相载体原理:

一、良好的ELISA板应该是吸附机能好,空缺值低。
二、为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定,然后比较结果。可作ELISA中载体的材料良多,最常用的是聚苯乙烯。在ELISA试剂盒中用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠,表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。
三、与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA试剂盒所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%。其长处是表面积极大,反应在悬液中进行,其速率与液相反应近似。
在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大,这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底,使用特殊的洗涤器,使小珠在洗涤过程中动弹淋洗,其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。ELISA试剂盒常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后,分别测每孔溶液的吸光度。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤利便,试剂盒一般均配以特殊仪器。
四、为便于作少量标本的检测,有制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与尺度ELISA板相同。聚苯乙烯ELISA板因为原料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大,因此,每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其机能。

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