TNF-a elisa试剂盒应用

TNF-a elisa试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人TNF-α抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人TNF-α会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人TNF-α抗体与结合在包被抗体上的人TNF-α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-α的浓度。

TNF-a elisa试剂盒构成：

96/48微孔板(1块,已包被抗小鼠TNF-a单抗)、样品稀释液(1瓶)、*抗体工作液(1瓶)、酶标抗体工作液(1瓶)、底物稀释液(1瓶)、终止液(1瓶)、洗涤液(20×,1瓶)、标准品(2000 pg/ml,2管,冻干粉)、OPD片(3片)、坐标纸(1张)。

TNF-a elisa试剂盒操作步骤：

1、设立标准孔8孔(根据样品蛋白浓度可调整为6孔),每孔中先各加入样品稀释液100 ul,*孔再加标准品100 ul,混匀后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反复作对倍稀释至第7孔,后,从第7孔中吸出100 ul弃去,使之体积均为100 ul。第8孔为空白对照。

2、加样:待测样品孔中每孔各加入待测样品100ul。

3、将反应板置于37 ℃×120 min。

4、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上扣干。

5、每孔中加入*抗体工作液50ul。

6、将反应板充分混匀后置37 ℃×60 min。

7、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次,向滤纸上扣干。

8、每孔加酶标抗体工作液100ul。

9、将反应板置于37 ℃ 120 min。

10、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次,向滤纸上扣干。

11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗处反应5~10 min。

12、每孔中加入50ul终止液混匀。

13、用酶标仪在492 nm处测吸光值。