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猪elisa试剂盒特点

简要描述:

加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。

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  猪elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被猪1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
 
  猪elisa试剂盒如何使用:
  1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5、每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。

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