小鼠elisa试剂盒血清盘中应有一定数量的临界值上、下含量的样品,以检验试剂的灵敏度。
小鼠elisa试剂盒血清盘的要求:
1、采用原血清;
2、血清盘应具有相应的稳定性;
3、血清盘中样本不含防腐剂,或只含极微量的、不影响检验结果的防腐剂;
4、血清盘所包含的阴性样本和阳性样本约各占一半;
5、阳性样本中,应有一定数量的强阳性和弱阳性样本;
6、血清盘中应有一定数量的临界值上、下含量的样品,以检验试剂的灵敏度。
7、血清盘中应包含与该项检验相关的病种样本和已积知具有干扰物质(RF因子)的样本,以检验试剂的特异性。
小鼠elisa试剂盒操作常见问题:
1.边缘效应使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应",即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应",并且可提高测定的重复性。
2.加样,在现在的ELISA商品试剂盒中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。