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人elisa试剂盒
实验标本采集必修课:
1)标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2)血清:使用不含热原的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
3)血浆:3000转离心30分钟取上清。
4)细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
5)组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎,3000转离心10分钟取上清。
6)保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量:
一、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的不*平竞争等因素的影响,结果重复性较差,质量较难控制。
二、试剂因素
不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量**,即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件。
三、样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等,后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。
四、操作因素对小鼠肿瘤标志物(CA724)ELISA试剂盒结果的影响:加样、温育、洗涤、显色、比色。
五、灰区的设置
通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。
六、标本复查
ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法。